狗狗怎么检测弓形虫?
2013-7-5更 最近在知乎上看到一些说做检查没有用的,我只能说一句:你丫傻逼吧!不做检查你凭什么认为你的狗没感染?!难道凭你说吗?而且你凭什么知道你家的狗没被其他感染了弓形的动物感染过呢?比如说,没感染的狗和感染了弓形的猫一起生活然后被你买回家…等等等!!这种例子还少么!!!所以不做检查你凭什么断定你家狗一定没有感染啊!!! 另外关于吃了药会不会造成胎儿畸形的问题,大家也不要听风就是雨,这个说法其实已经过时了(因为早先的研究对象是人而不是孕妇),目前国际上普遍认为服用乙酰甲喹对孕妇是安全的(当然最好还是在怀孕期不要用药)……所以说如果狗真的感染了弓形虫并且在体内发育成囊合子的话,吃不吃药都会导致孕妇流产或畸胎的…最后还是要看孕妈妈自身抗弓形的能力好不好…不过话说回来,既然都感染弓形虫了说明宝宝也难免有点小问题了不是…
原答案如下 因为之前一直觉得宠物医院的检测方法很不靠谱儿,所以我一直在找比较靠谱的方法测我的猫咪是否感染弓形虫,直到我看到这篇报道(文章链接在此)。
这篇文章详细介绍了美国国立生物技术信息中心如何检测弓形虫DNA的存在,并指出该种方法是现在最准确的方式之一(文章中用的是PCR,而我准备用real-time PCR来进一步确认这种方法的有效性)。
按照文中介绍,第一步需要取粪便样本,第二步则是分离DNA。具体步骤为:
1.将样品磨碎至粉末状;
2.加入6倍体积的无水乙醇浸泡过夜;
3.离心去乙醇沉淀;
4.加入2/3体积Tris-HCLpH8 (Tris羟脯氨酸混合液)重悬;
5.再加入1/3体积SDS (10%SDS溶液)混匀。
这一步的主要作用就是将粪样中细胞全部杀死,同时保证其中含有完整核膜及染色质的寄生虫核 DNA不会降解,为下一步提取提供条件。
6.加入饱和NaCl使样品完全溶解后,于4℃下13000rpm离心20min去除不溶物,收集上清即为含DNA的裂解液。
7.加入酚、氯仿抽提三次,去除蛋白及杂质。
8.加入异丙醇沉淀DNA,于-20℃放置一小时即可看到絮状沉淀出现。
9.洗涤DNA后用无水乙醇沉淀,真空干燥后即可得到待测标本中的总DNA。
以下是Real-Time PCR 的简要过程:
第一步,退火阶段:
第二步,延伸阶段:
实验结果判定:当Ct值大于阳性对照Ct值的2倍以上时视为未检测到病原体。
我计划以我家猫咪的三份粪便作为样本分别进行检测。如果结果呈阴性则表明它并未感染弓形虫,反之亦然。 至于检测的具体操作还需要参考更多文献才能确定。